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N端/C端检测项目
概述

蛋白大分子的N末端,C末端对于蛋白的结构稳定,功能,修饰都起着重大的作用。在药物结构确证分析中是必不可少的部分。

N端测序常见的方法为Edman降解法,但Edman降解法不能测出N端封闭,修饰等情况下的N端序列。质谱法N端可以克服这些不足,而且可以检测出对应的修饰,基本没有限制。

C末端没有类似Edman降解法类似的方式测序,国内外都基本认可和采用质谱法测试C末端,以及C末端修饰,如K丢失。

案例:凝血因子X激活剂

凝血因子X激活剂由3个亚基组成,实验对3个亚基分别进行序列覆盖率和N,C末端检测。经Trypsin、Chymotrypsin与Glu-C 3种酶切后,上LCMS检测鉴定。

结果:

1)alpha链

整合Trypsin、Chymotrypsin与Glu-C酶切鉴定结果所得综合覆盖率为:89%

NC1-2

N端1-14位氨基酸序列(LV**********FIE)鉴定质谱图及序列匹配

2)beta链整合

Trypsin、Chymotrypsin与Glu-C酶切鉴定结果所得综合覆盖率为:97%

NC2-1
NC2-2
NC2-3

N端1-20位氨基酸序列(LD****************KE)鉴定质谱图及序列匹配

C端122-134位氨基酸序列(RY********EC)鉴定质谱图及序列匹配

3)gamma链

整合Trypsin、Chymotrypsin与Glu-C酶切鉴定结果所得综合覆盖率为:100%

NC3-1
NC3-2
NC3-3

N端1-17位氨基酸序列(VL****************YK)鉴定质谱图及序列匹配

C端116-123位氨基酸序列(IA******KF)鉴定质谱图及序列匹配