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二硫键分析检测项目
概述

二硫键是蛋白质形成特定空间结构的重要化学键,在一条肽链上不同位置上的氨基酸之间形成二硫键,可以将肽链折叠成特定的空间结构。一个蛋白质分子可以由多个亚基组成,亚基之间也可通过二硫键相连,形成特定空间结构。二硫键与蛋白质高级结构的生物活性,复性都有关。故作为一种特殊的修饰,对其进行正确的鉴定对于生物药结构确证来说是至关重要的一部。

案例:rhNGF(重组人神经生长因子)二硫键分析

分析流程:

1

理论信息:

Trypsin酶切后理论酶切肽段 Num From-To MH+ HPLC pI Sequence 1 1- 9 1067.54 16.56 10.85 SSSHPIFHR 2 10- 25 1712.77 22.01 3.74 GEFSVCDSVSVWVGDK 3 26- 32 749.40 8.23 6.50 TTATDIK 4 33- 34 204.13 1.40 10.15 GK 5 35- 50 1791.93 17.75 4.31 EVMVLGEVNINNSVFK 6 51- 57 962.46 17.97 6.67 QYFFETK 7 58- 59 277.12 8.41 9.55 CR 8 60- 69 1058.44 11.96 3.92 DPNPVDSGCR 9 70- 74 519.28 8.22 6.99 GIDSK 10 75- 88 1723.78 21.14 8.69 HWNSYCTTTHTFVK 11 89- 95 735.37 11.07 6.99 ALTMDGK 12 96-100 631.33 12.84 10.80 QAAWR 13 101-103 435.27 14.49 10.85 FIR 14 104-114 1177.57 21.53 5.95 IDTACVCVLSR 15 115-115 147.11 1.09 9.47 K 16 116-117 189.12 2.24 6.97 AV

二硫键理论配对信息:

Cys15与Cys80配对 Cys58与Cys108配对 Cys68与Cys110配对

检测C-C 1.证明 C15-C80存在 2.证明 C58-C108和C68-C110存在 经计算二硫键肽段理论分子量与Trypsin理论酶切肽段分子量无相近及干扰。

结果:

检测到C-C连接肽段 1

el1

图中可见1718.27(2+)

el3

1719.27(2+)二级谱图

el5

图中可见1145.85(3+)

el7

1146.52(3+)二级谱图

检测到C-C连接肽段 2

el2

图中可见1256.06(2+)

el4

1256.56(3+)二级谱图

el6

图中可见837.71(3+)

el8

838.04(3+)二级谱图